15版藥典增補版-疫苗佐劑氫氧化鋁對牛血清白蛋白的吸附率解決方案

紫外可見分光光度法測定疫苗佐劑氫氧化鋁對牛血清白蛋白的吸附率

1.指導(dǎo)通則信息

1.1 依據(jù)指導(dǎo)通則號：3701氫氧化鋁佐劑（2015版中國藥典增補版三部生物制品新增指導(dǎo)通則部分【3.6 吸附率】）

1.2 指導(dǎo)通則名稱：3701氫氧化鋁佐劑

1.3 指導(dǎo)通則適用范圍：疫苗佐劑氫氧化鋁（包括原位吸附疫苗的鋁稀釋制劑）的質(zhì)量控制

1.4 指導(dǎo)通則發(fā)布時間：2018年7月19日

1.5 指導(dǎo)通則實施時間：2019年1月1日

1.6 發(fā)布單位：國家藥典委員會

2.吸附率項目標準正文

3.6 吸附率

        以氫氧化鋁對牛血清白蛋白的吸附作用計算吸附率。

       2.1  供試品溶液制備：取供試品適量，用生理氯化鈉溶液稀釋至鋁含量為1mg/mL，調(diào)節(jié)pH值至6.0~7.0，即為供試品溶液。同一種鋁佐劑不同批次的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)為固定值，以保證不同批次檢測的批間一致性。

        2.2 牛血清白蛋白（簡稱牛白）溶液：取牛血清白蛋白適量，用生理氯化鈉溶液配置成10mg/ mL溶液，調(diào)節(jié)pH與供試品溶液pH一致。

       2.3  測定法：取15mL離心管5支，分別加牛血清白蛋白溶液（10mg/ mL）0.08 mL、0.16 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL，并補生理氯化鈉溶液至4.0 mL，混勻后，每管分別加入供試品溶液1.0 mL，混勻，使各管牛血清白蛋白分別為0.8 mg、1.6 mg、4 mg、8 mg、12 mg，各管鋁為1 mg。

       2.4  將上述各管室溫放置1小時（期間每隔10分鐘用力振搖1次）后，5000g離心10分鐘收集上清液，采用Lowry法（通則0731）或其它適宜方法測定各管上清液中游離牛血清白蛋白含量，記錄各管OD值并計算蛋白含量，以各管上清液游離的牛血清白蛋白含對應(yīng)其牛血清白蛋白總量計算各管吸附率（A）。上清液體積按5 mL計算。

         吸附率（A）%=100×（牛血清白蛋白總量－上清液游離蛋白含量）/牛血清白蛋白總量

       2.5  結(jié)果判定：牛白含量為0.8 mg、1.6 mg的2管上清蛋白應(yīng)為未檢出，即吸附率應(yīng)不低于90%；且牛白含量為4 mg、8 mg、12 mg各管OD值應(yīng)成總體遞增趨勢（如OD值無法判定，需通過檢測上清蛋白含量判定總體遞增趨勢），吸附率判為合格。

        2.6 如供試品鋁含量低于1 mg/ mL，可按適當(dāng)比例調(diào)整上述各管鋁含量和牛白含量后進行。結(jié)果判定以每1mg  鋁吸附1.6 mg牛白的吸附率應(yīng)不低于90%（即上清蛋白未檢出），且每1 mg鋁與更高濃度牛白吸附時，隨牛白含量的遞增各管OD值應(yīng)呈總體遞增趨勢（如OD值無法判定，需通過檢測上清蛋白含量判定總體遞增趨勢），吸附率判為合格。

3.分析方法簡述

        根據(jù)標準正文內(nèi)容，上清液游離蛋白含量采用Lowry法或其它適宜方法，2015版藥典四部0731蛋白質(zhì)含量測定法中提到福林酚法（Lowry）或其它方法共6種，均采用紫外分光光度計來進行分析檢測。方法相關(guān)信息如下表所示：

4.儀器配置方案

根據(jù)標準解析內(nèi)容，推薦以下適用的產(chǎn)品：