15版藥典增補(bǔ)版-疫苗佐劑氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附率解決方案

紫外可見分光光度法測(cè)定疫苗佐劑氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附率

1.指導(dǎo)通則信息

1.1 依據(jù)指導(dǎo)通則號(hào)：3701氫氧化鋁佐劑（2015版中國藥典增補(bǔ)版三部生物制品新增指導(dǎo)通則部分【3.6 吸附率】）

1.2 指導(dǎo)通則名稱：3701氫氧化鋁佐劑

1.3 指導(dǎo)通則適用范圍：疫苗佐劑氫氧化鋁（包括原位吸附疫苗的鋁稀釋制劑）的質(zhì)量控制

1.4 指導(dǎo)通則發(fā)布時(shí)間：2018年7月19日

1.5 指導(dǎo)通則實(shí)施時(shí)間：2019年1月1日

1.6 發(fā)布單位：國家藥典委員會(huì)

2.吸附率項(xiàng)目標(biāo)準(zhǔn)正文

3.6 吸附率

        以氫氧化鋁對(duì)牛血清白蛋白的吸附作用計(jì)算吸附率。

       2.1  供試品溶液制備：取供試品適量，用生理氯化鈉溶液稀釋至鋁含量為1mg/mL，調(diào)節(jié)pH值至6.0~7.0，即為供試品溶液。同一種鋁佐劑不同批次的pH值應(yīng)調(diào)節(jié)為固定值，以保證不同批次檢測(cè)的批間一致性。

        2.2 牛血清白蛋白（簡(jiǎn)稱牛白）溶液：取牛血清白蛋白適量，用生理氯化鈉溶液配置成10mg/ mL溶液，調(diào)節(jié)pH與供試品溶液pH一致。

       2.3  測(cè)定法：取15mL離心管5支，分別加牛血清白蛋白溶液（10mg/ mL）0.08 mL、0.16 mL、0.4 mL、0.8 mL、1.2 mL，并補(bǔ)生理氯化鈉溶液至4.0 mL，混勻后，每管分別加入供試品溶液1.0 mL，混勻，使各管牛血清白蛋白分別為0.8 mg、1.6 mg、4 mg、8 mg、12 mg，各管鋁為1 mg。

       2.4  將上述各管室溫放置1小時(shí)（期間每隔10分鐘用力振搖1次）后，5000g離心10分鐘收集上清液，采用Lowry法（通則0731）或其它適宜方法測(cè)定各管上清液中游離牛血清白蛋白含量，記錄各管OD值并計(jì)算蛋白含量，以各管上清液游離的牛血清白蛋白含對(duì)應(yīng)其牛血清白蛋白總量計(jì)算各管吸附率（A）。上清液體積按5 mL計(jì)算。

         吸附率（A）%=100×（牛血清白蛋白總量－上清液游離蛋白含量）/牛血清白蛋白總量

       2.5  結(jié)果判定：牛白含量為0.8 mg、1.6 mg的2管上清蛋白應(yīng)為未檢出，即吸附率應(yīng)不低于90%；且牛白含量為4 mg、8 mg、12 mg各管OD值應(yīng)成總體遞增趨勢(shì)（如OD值無法判定，需通過檢測(cè)上清蛋白含量判定總體遞增趨勢(shì)），吸附率判為合格。

        2.6 如供試品鋁含量低于1 mg/ mL，可按適當(dāng)比例調(diào)整上述各管鋁含量和牛白含量后進(jìn)行。結(jié)果判定以每1mg  鋁吸附1.6 mg牛白的吸附率應(yīng)不低于90%（即上清蛋白未檢出），且每1 mg鋁與更高濃度牛白吸附時(shí)，隨牛白含量的遞增各管OD值應(yīng)呈總體遞增趨勢(shì)（如OD值無法判定，需通過檢測(cè)上清蛋白含量判定總體遞增趨勢(shì)），吸附率判為合格。

3.分析方法簡(jiǎn)述

        根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)正文內(nèi)容，上清液游離蛋白含量采用Lowry法或其它適宜方法，2015版藥典四部0731蛋白質(zhì)含量測(cè)定法中提到福林酚法（Lowry）或其它方法共6種，均采用紫外分光光度計(jì)來進(jìn)行分析檢測(cè)。方法相關(guān)信息如下表所示：

4.儀器配置方案

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)解析內(nèi)容，推薦以下適用的產(chǎn)品：